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  • NAGO SHARE ▏“你是我的眼”——液相色譜檢測器!
    2022-11-08


    隨著高效液相色譜儀(HPLC)的快速發展,越來越多的化妝品企業都配置有一定數量的HPLC。無論是原料鑒別、質控,抑或是限、禁用物質的定性定量檢測,都發揮著至關重要的作用。

    本期我們來了解HPLC重要的核心之一:色譜之眼——檢測器。

    檢測器的作用

    Function of detector

    隨時間推移,樣品組分在經過色譜柱有效分離后,在經過檢測器時,會產生特定的信號,檢測器將之轉換、放大為可供檢測的信號,由數據記錄系統記錄下來,形成色譜圖,從而定性、定量分析待測組分。毫不夸張地說,沒有檢測器,HPLC就是一個“瞎子”,任何物質從其面前經過,也只能熟視無睹。

    不同的檢測器其使用范圍有所不同,因此需要掌握不同檢測器的原理。

    液相色譜常用的檢測器包括:紫外檢測器(UVD或DAD/PDA/PDAD)、熒光檢測器(FLD)、示差折光檢測器(RID)、蒸發光散射檢測器(ELSD)、質譜檢測器(MSD)等。


    紫外檢測器

    UV detector

    是目前液相色譜中應用最廣泛的檢測器。自然界中大部分有機物和部分無機物都具有紫外吸收能力,紫外檢測器根據化合物對紫外光的吸收能力,從而進行分析。現在經常能聽到的紫外檢測器(UVD)、光電二極管陣列檢測器(DAD,也稱PDA、PDAD),都是基于這個原理。

    它有兩個流通池,一個參比,一個測量。光源發出的紫外光照射到流通池上,若兩個流通池都通過純的均勻溶劑,則它們在紫外波長下幾乎無吸收,光電管上接受到的輻射強度相等,無信號輸出;當組分進入測量池時,吸收一定的紫外光,使兩光電管接受到的輻射強度不等,這時有信號輸出,輸出信號大小與組分濃度有關。

    許多紫外檢測器光源采用的是氘燈,使用范圍一般是190-800nm,開發方法時,需要考慮化合物的最大吸收波長,同時應避開流動相的吸收干擾來選擇合適的檢測波長。

    熒光檢測器

    Fluorescence detector

    適用于能激發熒光的化合物。很多與生命科學有關的物質,如氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及某些代謝藥物都可以用熒光法檢測。熒光檢測器在生物樣品痕量分析中具有重要作用。

    但由于自然界中,能夠產生熒光的物質較少,相當一部分物質需要進行熒光衍生后,才可以進行檢測(如微量的肽和氨基酸)。樣品的局限導致其應用受限,但FLD靈敏度極高,讓其在檢測方面發揮著至關重要的作用。


    示差折光檢測器

    Differential refractometer

    通用型檢測器,利用物質的折光效應,對所有物質均有響應,只要被測組分與洗脫液的折光指數有差別就可使用。各類糖類化合物、脂肪烷烴等,因沒有紫外吸收,一般常用示差折光檢測器。

    它的通用性比UVD廣,但靈敏度要低。與FLD相似,RID也有“短板”——對溫度變化敏感,是所有檢測器中對溫度要求最高的,同時還不能采用梯度洗脫。因為任何使流動相比例發生改變的因素,都會引起基線的持續變化且難以平衡,這也限制了RID的使用。

    蒸發光散射檢測器

    Evaporative light scattering detector


    一種通用型的檢測器,原理是利用光散射效應,可檢測揮發性低于流動相的樣品,通過霧化器去除溶劑,讓化合物形成懸浮顆粒,從而形成散射效應。ELSD靈敏度比RID高,對溫度變化不敏感,基線穩定,可用于梯度洗脫,但不能使用不揮發的鹽類溶劑,而要用醋酸銨之類的揮發性緩沖鹽來代替。目前,ELSD已被廣泛應用于碳水化合物、類脂、脂肪酸、藥物以及聚合物等的檢測。


    質譜檢測器

    Mass spectrometer detector


    通用型檢測器,液相色譜-質譜聯用儀(LC-MS)就是應用了MSD,在靈敏度、選擇性、通用性及化合物的分子量和結構信息的提供等方面都有突出的優點。但它的昂貴操作費用和復雜性在一定程度上限制了它的推廣應用。

    由此可見,作為HPLC核心之一的檢測器,充當著“眼睛”,發揮著極其重要的作用。如果檢測器不合適,再優秀的前處理、柱分離技術,也無法完成檢測任務。



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